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前列腺特異性抗原(包被)100 ul巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒PSA 鼠抗前列腺特異性抗原(檢測)20 ul巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒CPSA(mouse monoclonal) 復合前列腺特
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產品名稱 | 中華鱘特定基因序列PCR檢測試劑盒規格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7892 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
二甲偶氮紫Ic-Kit (Ab81) Mouse mAb-2-羥基甲
二甲基偶氮磺IIIc-Kit (Ab81) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-氨基煙酸
H-間二酚(>97.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody5-氨基-2-吡啶羧酸
偶氮磺III(>90.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody2-己基-1-癸
2-(磺基偶氮)-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸三鈉鹽水合物(>95.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb氟-甲氧基
2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二甲氨基酚(>93.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb5-芐氧基吲哚-
(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-1,二(>98.0%(T))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb蒎
5-二基-2-(2-吡啶偶氮)酚(>98.0%(HPLC))JMJD1B (C69G2) Rabbit mAb基甲酸
2,2'-二羥基偶氮(>98.0%(T))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAbL(-)巖藻糖
芪偶氮Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAb(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜烷-2-基)
熒光鎵試劑(>98.0%(T))ZIP7/SLC39A7 (D1O3A) Rabbit mAb鹽酸強力霉素
浴酮靈二磺酸二鈉鹽Cofilin (D59) Antibody溴甲酸酯
水合紅菲繞啉二磺酸鈉水合物MARK1 Antibody2-甲基-6-基
浴銅靈 (升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Phospho-Ras-GRF1 (Ser916) Antibody富馬酸單酯
紅菲繞啉(升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Ras-GRF1 AntibodyGRUBB‘S第二代催化劑
浴銅靈(>98.0%(T))Axin1 (C7B12) Rabbit mAb甘氨酸芐酯鹽酸鹽
新亞銅試劑半水合物(>98.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr232) Antibody6-硝基-1-茚滿酮
紅菲咯啉(>99.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr220) Antibody甲基-1-茚酮
巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒PHD2 脯氨酸羥化酶2100 ul
巨噬細胞炎癥蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒PS-1 (NT) 早老素蛋白-120 ul
巨噬細胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒PS-1(CT) 早老素蛋白-1100 ul
巨噬細胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒PS-1 早老素蛋白-1300 ul
巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒PSA 前列腺特異性抗原(包被)100 ul
巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒PSA 鼠抗前列腺特異性抗原(檢測)20 ul
巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒CPSA(mouse monoclonal) 復合前列腺特異性抗原100µl
巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒PMSA/FOLH1 前列腺特異膜抗原100 ul
巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒PSAP/PAP 前列腺酸性酸酶100 ul
中華鱘特定基因序列PCR檢測試劑盒規格去整合素樣金屬蛋白酶8抗體Haginin A中文名:別名:分子式:C17H16O5
芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?/font>3抗體Isoficusin A中文名:別名:分子式:C25H24O5
磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體Narirutin中文名:蕓香柚皮苷別名:柚皮蕓香苷; Isonaringin分子式:C27H32O14
磷酸化肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體Fura(2",3":7,6)-4'-hydroxyflavane中文名:呋喃(2",3":7,6)-4'-羥基二氫黃酮別名:分子式:C17H12O4
2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體Iridin中文名:野鳶尾苷別名:分子式:C24H26O13
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。